96孔PCR儀是一種用于進行聚合酶鏈式反應(PCR)的實驗設備,能夠同時對96個樣品進行擴增反應。它廣泛應用于分子生物學、醫學診斷、基因研究等領域,為科研人員提供了高效、便捷的實驗工具;通過控制溫度的變化,使DNA在變性、退火、延伸等步驟中進行循環復制,從而實現特定DNA片段的快速擴增。在實時熒光定量PCR儀中,還能在擴增過程中實時監測熒光信號,對目標基因進行定量分析。
96孔PCR儀的結構組成:
-熱循環系統:是PCR儀的核心部件,能夠準確控制反應體系的溫度變化,確保PCR反應的各個階段在合適的溫度下進行。其加熱和冷卻速度較快,可有效縮短PCR循環周期時間,提高實驗效率。
-樣本支持系統:通常配備96孔的標準反應板,用于放置待擴增的樣品。這種標準化的設計使得樣品的處理和操作更加方便,也便于與其他實驗設備和試劑進行配套使用。部分PCR儀還支持不同類型的反應板,如384孔板等,以滿足不同規模實驗的需求。
-熒光檢測系統:在實時熒光定量PCR儀中,熒光檢測系統用于監測反應過程中的熒光信號。它包括激發光源、光路傳輸系統和熒光檢測器等。光學系統能夠保證高光密度與一致的導光距離,消除光學邊緣效應,提高檢測的準確性和靈敏度。
96孔PCR儀的使用注意事項:
1.儀器操作方面
-開機順序:先打開電腦,再打開定量PCR儀底座開關,最后啟動配套的軟件,避免因開機順序不當導致儀器無法正常啟動或出現故障。
-禁止人為干擾:部分PCR儀上部有蓋的部分為全自動控制,在通電狀態下嚴禁任何形式人為干擾上蓋開啟或者關閉的行為,否則會導致上蓋故障,影響儀器的正常使用。
-定期維護:按照儀器的使用說明書,定期對PCR儀進行清潔、校準和維護,確保儀器的性能穩定和檢測結果的準確性。
2.實驗操作方面
-防止污染:整個實驗過程要在無菌、無核酸酶污染的環境中進行,避免外界因素對實驗結果的影響。實驗前要對實驗室進行消毒和清潔,實驗過程中要佩戴一次性手套、口罩和帽子等,防止雜質和微生物進入反應體系。
-準確加樣:使用移液器加樣時,要確保移液器的準確性和精度,定期對移液器進行校準。加樣過程中要避免氣泡產生,以免影響反應體系的體積和成分,導致實驗結果不準確。
-避免交叉污染:在取樣和加樣的過程中,需要使用不同的移液器和吸頭,避免不同樣品之間的交叉污染。同時,要注意PCR板和封板膜的清潔,防止殘留的樣品或試劑對其他孔造成污染。
-貼膜規范:使用封板膜時,要注意撫平封板膜,避免產生氣泡,影響熒光信號的檢測。并且要確保封板膜覆蓋PCR板的各個孔,防止液體蒸發。
3.試劑與耗材方面
-試劑質量:確保使用的PCR試劑質量可靠,在有效期內使用。不同廠家、不同批次的試劑可能會對實驗結果產生影響,因此在使用前最好進行預實驗,以選擇合適的試劑。
-耗材選擇:選用質量好、透明度高、無熒光背景干擾的96孔PCR板和光學級封板膜,以保證熒光信號的檢測效果。同時,要注意PCR板的平整度和孔的均一性,避免因PCR板的質量問題導致實驗結果不準確。